期刊简介
1985年创刊，中国科协主管，中华医学会主办，中山大学附属第一医院承办。本刊是我国内儿科肾脏病学科领域高水平的专业期刊，对促进肾脏病学术交流及发展，起着重要的指导作用。本刊报道我国肾脏病领域领先的科研成果及临床诊疗经验。主要栏目有述评、论著、短篇论著、讲座、综述、临床病理（病例）讨论、病例报告、经验交流、会议纪要、国际学术动态。本刊的办刊宗旨：理论与实践相结合，基础与临床相结合，普及与提高相结合，为培养我国的肾脏病医学人才服务，为我国肾脏病患者的健康服务。读者对象：内科及儿科肾脏病临床和先关科研教学人员。
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首页>中华肾脏病杂志
- 杂志名称：中华肾脏病杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1001-7097
- 国内刊号：44-1217/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CA 化学文摘(美), 万方收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
大鼠脂肪源性干细胞PDE5基因沉默对肾小管上皮细胞缺血-复氧损伤的保护作用
黄昭；陈伟明；于晓春；刘继云
关键词：环核苷酸磷酸二酯酶类, 5型, 再灌注损伤, 干细胞
摘要：目的 探讨慢病毒介导抑制脂肪源性干细胞(adipose?derived stem cells,ADSCs)磷酸二酯酶5(phosphodiesterase 5,PDE5)基因表达对缺血?复氧(ischemia/reoxygenation,I/R)损伤的大鼠肾小管上皮细胞(NRK?52E)增殖和凋亡的影响,以及ADSCs自身分泌功能和上皮转化功能的改变. 方法 分离纯化大鼠ADSCs ,传代培养及鉴定;构建PDE5?shRNA慢病毒表达载体及阴性对照(NCshRNA),采用慢病毒包装系统介导建立稳定PDE5低表达的ADSCs , Western印迹法检测PDE5蛋白表达;建立肾小管上皮细胞体外I/R模型,并建立ADSCs和NRK?52E细胞的Transwell非接触共培养体系;Edu法检测各组NRK?52E细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡;ELISA法检测各组上清中肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)和成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)水平;实时荧光定量PCR法检测E钙黏蛋白(E?cadherin)mRNA表达,流式细胞仪检测细胞角蛋白18(Cytokeratin 18 ,CK18)的表达. 结果 成功构建PDE5?shRNA慢病毒表达载体,筛选并成功建立PDE5稳定低表达的ADSCs细胞系;与正常对照组相比较,I/R组NRK?52E细胞增殖率受到显著抑制,总凋亡率明显增加(P<0.05),ADSCs共培养上清液中HGF及FGF水平升高(均P<0.05);而与阴性对照组相比,与PDE5?shRNA转染组ADSCs共培养的NRK?52E细胞增殖显著增加,凋亡率明显下降,且HGF、FGF水平进一步升高,ADSCs上皮细胞标志物E?cadherin及CK18均表达显著增加,以上差异均有统计学意义(均P<0.05). 结论 本研究应用慢病毒载体介导ADSCs稳定低表达PDE5 ,可能通过促进干细胞分泌多种生长因子,有效改善肾小管细胞I/R状态下增殖及凋亡,同时促进自身向上皮细胞分化,为干细胞体内移植治疗肾脏缺血再灌注损伤中增加肾小管上皮细胞的生存活力、提升干细胞治疗效能提供了初步的实验基础.
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